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企業(yè)展示正常情況下機(jī)體內(nèi)凝血和抗凝血系統(tǒng)相互拮抗，使血液呈液體狀態(tài)完成全身的血液循環(huán)[1]。但機(jī)體凝血和抗凝血系統(tǒng)功能在受到某些因素的影響，如外傷和感染時(shí)會(huì)發(fā)生紊亂，導(dǎo)致血栓形成。血管內(nèi)皮損傷、血流紊亂和凝血反應(yīng)異常是影響血栓形成的主要因素，通常三個(gè)因素相互作用、但常以某一因素為主[2]。在血栓性疾病中，有缺血性腦血管病、心肌梗死、肺栓塞以及手術(shù)或外傷后引起的各種動(dòng)靜脈血栓等。這些血栓性疾病涉及多學(xué)科并且發(fā)病率高，而且具有很高的致死率和致殘率。因此建立臨床相關(guān)性高、穩(wěn)定性高的血栓類(lèi)動(dòng)物模型，對(duì)于支持和促進(jìn)血栓性疾病治療的藥物開(kāi)發(fā)是十分必要的。
一、體外血栓模型
采集動(dòng)物的新鮮動(dòng)脈血液，用枸櫞酸鈉抗凝，制備血栓，試驗(yàn)前需用PBS對(duì)血栓進(jìn)行充分洗滌至無(wú)明顯紅細(xì)胞掉落。選取合適的反應(yīng)體系將藥物和血栓孵育一定時(shí)間后，取上清液進(jìn)行OD值測(cè)量，以O(shè)D值的高低反應(yīng)溶栓效果（圖1）。
【圖1】阿替普酶在體外血栓模型中的溶栓效果
二、半體內(nèi)血栓模型
半體內(nèi)血栓模型采用的是大鼠動(dòng)靜脈旁路模型。大鼠麻醉后仰臥姿勢(shì)固定，分離左側(cè)頸總動(dòng)脈和右側(cè)頸外靜脈，然后取一根用生理鹽水浸泡滿的聚乙烯套管（由三段聚乙烯管制成，在中間管放入放置一根5cm長(zhǎng)的絲線），一端先插入左側(cè)頸總動(dòng)脈，另一端插入右側(cè)頸外靜脈，絲線固定。動(dòng)脈端用動(dòng)脈夾夾住，打開(kāi)動(dòng)脈夾后血液從右側(cè)頸總動(dòng)脈經(jīng)聚乙烯管返回左頸外靜脈形成血流回路[3]。血流中的血小板接觸旁路循環(huán)中的絲線粗糙面時(shí)，可發(fā)生黏附、聚集，環(huán)繞絲線表面形成血栓。可于動(dòng)靜脈旁路開(kāi)通之前或之后給予藥物，以絲線附著的血栓濕重和干重評(píng)判藥物抗血小板聚集效果（圖2）。
【圖2】大鼠動(dòng)靜脈旁路血栓模型
三、體內(nèi)血栓模型 3.1 ? 機(jī)械誘導(dǎo)法 3.2 ? 電流損傷法 3.3 ? 光化學(xué)誘導(dǎo)法
本法系將光敏物質(zhì)，如虎紅B、熒光素鈉等，注射入機(jī)體后在特定波長(zhǎng)光線的照射激發(fā)下，光敏物質(zhì)產(chǎn)生單態(tài)氧繼而損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞引起白細(xì)胞附壁激發(fā)血小板粘附、聚集而形成血栓。光化學(xué)法可以用于建立腦血栓模型和冠狀動(dòng)脈血栓模型等。麻醉大鼠后經(jīng)左側(cè)顳部入路，于左眼外眥和左耳外耳道連線上作一垂直的長(zhǎng)約2cm的弧形切口，分離顳肌去除顴弓，撐開(kāi)下頜關(guān)節(jié)，在卵圓孔前上方用顱骨鉆磨薄顱骨，拆開(kāi)后即可見(jiàn)大腦中動(dòng)脈（MCA），靜脈注射虎紅B用激光MCA可形成血栓，造成腦梗死，可通過(guò)神經(jīng)功能損傷評(píng)分和腦梗死面積評(píng)價(jià)。冠狀動(dòng)脈血栓模型是在呼吸機(jī)的輔助下，開(kāi)胸暴露左冠狀動(dòng)脈前降支，連接心電圖監(jiān)測(cè)梗死情況，注射光敏物質(zhì)后激光照射，ST段抬高0.1 mV時(shí)表明血栓形成，心肌已經(jīng)缺血，可以通過(guò)心臟超聲和TTC染色評(píng)價(jià)[5]。
3.4 ? 化學(xué)藥物誘導(dǎo)法
是指使用一些特殊化學(xué)試劑（FeCl3、胰蛋白酶、過(guò)氧化氫等）使血管內(nèi)膜受損而形成血栓。其中常用的是FeCl3血栓形成法，此方法易操作、重復(fù)性好，形成的血栓結(jié)構(gòu)接近于人類(lèi)自發(fā)形成的血栓結(jié)構(gòu)，對(duì)進(jìn)一步的研究有著顯著的意義。小鼠的頸動(dòng)脈血栓模型和下腔靜脈血栓模型常用FeCl3損傷，以浸滿FeCl3的小濾紙片敷在血管上方損傷血管，同時(shí)進(jìn)行血管血流檢測(cè)（圖3）。FeCl3還可用于腦血栓模型，分離MCA的方法同光化學(xué)誘導(dǎo)法，暴露MCA后敷上浸滿FeCl3的小濾紙片15min可造成腦缺血，可通過(guò)神經(jīng)功能損傷評(píng)分和腦梗死面積評(píng)價(jià)。
【圖3】FeCl3誘導(dǎo)的小鼠頸動(dòng)脈血栓模型
3.5 ? 手術(shù)法
結(jié)語(yǔ) 血栓類(lèi)動(dòng)物模型在探究凝血機(jī)制以及藥物篩選和藥效學(xué)評(píng)價(jià)方面扮演了重要角色，為支持血栓性疾病治療的藥物開(kāi)發(fā)提供了可靠的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。目前已經(jīng)發(fā)展出多種成熟的動(dòng)物血栓模型，鑒于每種血栓模型都有其獨(dú)特特點(diǎn)，因此在選擇和應(yīng)用血栓動(dòng)物模型時(shí)，應(yīng)根據(jù)研究目的和需求選擇適當(dāng)?shù)姆椒ā?/span>例如，電流損傷法適用于作動(dòng)脈血栓的研究，結(jié)扎法則適用于作靜脈血栓的研究，機(jī)械損傷法在動(dòng)脈血栓和靜脈血栓中均適用。對(duì)于研究腦血栓栓塞，可以選擇FeCl3血栓形成法和光化學(xué)法。 有濟(jì)醫(yī)藥的心腦血管藥效學(xué)研究平臺(tái)配備科學(xué)、先進(jìn)的儀器設(shè)備，有多名經(jīng)驗(yàn)豐富的專(zhuān)題負(fù)責(zé)人，在模型構(gòu)建和藥效學(xué)評(píng)價(jià)方面具有豐富的研究經(jīng)驗(yàn)和項(xiàng)目申報(bào)經(jīng)驗(yàn)，能夠提供全面的血栓類(lèi)動(dòng)物模型的藥效評(píng)價(jià)以及相關(guān)的機(jī)制探究服務(wù)。
