1.實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)(Real-time Quantitative PCR Detecting System, qPCR)

是常規(guī)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR技術(shù)的升級(jí)版，通過(guò)監(jiān)控PCR反應(yīng)體系中途產(chǎn)生熒光信號(hào)的強(qiáng)度，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR反應(yīng)過(guò)程中目標(biāo)分子的數(shù)量變化。該技術(shù)具有快速、準(zhǔn)確、靈敏、高通量和高自動(dòng)化等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析、突變檢測(cè)、病原體檢測(cè)、拷貝數(shù)變異分析等領(lǐng)域。

技術(shù)原理：在PCR反應(yīng)中添加一定濃度的熒光探針，使其與擴(kuò)增產(chǎn)物靶標(biāo)的結(jié)合，即可產(chǎn)生強(qiáng)熒光信號(hào)。反應(yīng)進(jìn)行過(guò)程中，熒光信號(hào)強(qiáng)度與擴(kuò)增靶標(biāo)量成正比。PCR反應(yīng)體系中加入雙鏈DNA結(jié)構(gòu)和熒光探針，因此反應(yīng)進(jìn)行過(guò)程中擴(kuò)增物會(huì)降解熒光探針，從而發(fā)出特定的熒光信號(hào)。這個(gè)熒光信號(hào)強(qiáng)度與PCR反應(yīng)體系中反應(yīng)產(chǎn)生的數(shù)量成正比，因此可以通過(guò)計(jì)量初始模板數(shù)量來(lái)對(duì)樣本中的總量進(jìn)行定量。

應(yīng)用領(lǐng)域：檢測(cè)DNA和RNA的定量，包括基因表達(dá)、突變檢測(cè)、體細(xì)胞測(cè)序、病毒檢測(cè)以及細(xì)胞壽命檢測(cè)等方面。如基因表達(dá)定量和分析，研究基因調(diào)控和功能；病毒、細(xì)菌和感染性疾病的檢測(cè)，追蹤病原體大量表達(dá)的特定基因；物種的DNA鑒定、認(rèn)證和鑒別，如分子生態(tài)學(xué)和食品安全領(lǐng)域；檢測(cè)某些人類(lèi)遺傳疾病、病理性基因突變和癌癥等的診斷和篩查；檢測(cè)基因工程產(chǎn)品和轉(zhuǎn)基因食品中的外源基因。

技術(shù)優(yōu)勢(shì)：qPCR技術(shù)具有實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)、快速、靈敏、高通量、準(zhǔn)確性高、自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)。該技術(shù)能夠在PCR反應(yīng)過(guò)程中持續(xù)收集和分析熒光信號(hào)，實(shí)現(xiàn)即時(shí)、動(dòng)態(tài)地監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增的過(guò)程和反應(yīng)結(jié)果。其靈敏度更高，能夠檢測(cè)非常低的核酸濃度，檢測(cè)下限可達(dá)到一兩個(gè)分子，同時(shí)也可定量非常高的核酸濃度。由于該技術(shù)過(guò)程可自動(dòng)執(zhí)行，每個(gè)樣品反應(yīng)時(shí)間一致，消除了人為誤差，因此具有很高的準(zhǔn)確性、可重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性等顯著優(yōu)勢(shì)，成為分子生物學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究的重要工具。

2.流式熒光技術(shù)（Luminex）

是一種基于熒光標(biāo)記和微珠子技術(shù)的分析方法，能夠快速、高通量地檢測(cè)多種生物分子（如蛋白質(zhì)、核酸、激素等）的存在和定量。該技術(shù)采用基于珠子表面標(biāo)記的識(shí)別系統(tǒng)，并通過(guò)激光和光傳感器實(shí)現(xiàn)對(duì)熒光標(biāo)記的高通量定量。這種技術(shù)廣泛應(yīng)用于基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域，尤其在臨床診斷和治療方面有著廣泛的應(yīng)用。使用不同染色微球和流式細(xì)胞術(shù)原理，可實(shí)現(xiàn)同時(shí)檢測(cè)100個(gè)生物標(biāo)志物。

技術(shù)原理：通過(guò)使用不同配比的兩種紅色熒光染料將聚苯乙烯微球染成不同的熒光，獲得多個(gè)熒光編碼的微球，進(jìn)而針對(duì)不同待檢測(cè)分析物的捕獲抗體共價(jià)偶聯(lián)到特定的編碼微球上，加入待檢樣本及生物素標(biāo)記的抗體，所形成的抗體復(fù)合物再與熒光素PE發(fā)生反應(yīng)，通過(guò)Luminex機(jī)器采集熒光信號(hào)對(duì)最后的樣本進(jìn)行定量。

應(yīng)用領(lǐng)域：Luminex主要應(yīng)用于PD多因子檢測(cè)等領(lǐng)域，生物標(biāo)志物的篩選，癌癥、代謝、免疫、神經(jīng)性疾病的研究等方面發(fā)揮重要作用。

技術(shù)優(yōu)勢(shì)：檢測(cè)高效，選擇指標(biāo)多，能夠?qū)崿F(xiàn)核酸和蛋白質(zhì)檢測(cè)的應(yīng)用，同一個(gè)Panel內(nèi)可自由組合待測(cè)因子，可同時(shí)檢測(cè)數(shù)十種待測(cè)分析物；靈敏度高，精確定量下限低至0.1 pg/mL；樣品用量少，只需低至25μL的樣品體積；穩(wěn)定性高，不同組合配有獨(dú)特優(yōu)化的緩沖液，可有效減少假陽(yáng)性；技術(shù)成熟：金標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證，與Quantikine進(jìn)行相關(guān)性驗(yàn)證，且有QC control對(duì)照。

3.流式細(xì)胞術(shù)(Flow cytometry)

該技術(shù)操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、定量準(zhǔn)確，已廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)研究，它在免疫治療生物標(biāo)志物的檢測(cè)與研究中發(fā)揮了重要作用。

技術(shù)原理：將全血、組織樣本等制成單細(xì)胞懸液，細(xì)胞在流式細(xì)胞儀的激光的照射下產(chǎn)生相應(yīng)的散射光和激光信號(hào)，計(jì)算機(jī)分析系統(tǒng)會(huì)接收的不同光信號(hào)進(jìn)行分析處理。

應(yīng)用領(lǐng)域：流式在細(xì)胞DNA含量檢測(cè)、細(xì)胞表型分析、細(xì)胞功能分析、細(xì)胞表面或胞內(nèi)蛋白分析、紅細(xì)胞疾病的診斷、可溶性蛋白檢測(cè)、細(xì)胞的分選等發(fā)揮重要作用；細(xì)胞動(dòng)力學(xué)研究（抗體修飾NK細(xì)胞，CAR-T/NK細(xì)胞等）；抗體內(nèi)吞研究等。

技術(shù)優(yōu)勢(shì)：對(duì)單個(gè)細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行快速、逐個(gè)檢測(cè)、測(cè)量速度可達(dá)每秒數(shù)千甚至上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞；靈敏度高，每個(gè)細(xì)胞上只需帶有1000~3000個(gè)熒光分子即可檢測(cè)出來(lái)；精密度高，相比其他檢測(cè)技術(shù)，流式的變異系數(shù)更小，分辨率更高，可在保證細(xì)胞不被破壞的情況下進(jìn)行分析；可以把制定特征的細(xì)胞分選出來(lái)，分選細(xì)胞的純度可達(dá)99%以上。

4.酶聯(lián)免疫分析（ELISA）

是一種利用特異性抗體和酶的偶聯(lián)反應(yīng)檢測(cè)生物分子的技術(shù)。很早被應(yīng)用于體液樣本臨床蛋白標(biāo)志物檢測(cè)的技術(shù)，使用簡(jiǎn)單方便，在實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用廣泛，已經(jīng)使用了幾十年，因而也被當(dāng)成“金標(biāo)準(zhǔn)”來(lái)使用。酶聯(lián)免疫分析類(lèi)型包括：直接法(Direct ELISA)、競(jìng)爭(zhēng)法(Competitive ELISA)、間接法( Indirect ELISA )和夾心法(Sandwich ELISA)。

技術(shù)原理：使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開(kāi)，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應(yīng)效果，從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。

應(yīng)用領(lǐng)域：細(xì)胞因子檢測(cè)，如白介素、選擇素、集落刺激因子，腫瘤壞死因子，干擾素，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子，趨化因子，細(xì)胞因子受體，粘附分子，生長(zhǎng)因子，凋亡因子等；心肌梗塞檢測(cè)，如肌鈣蛋白，肌紅蛋白，C-反應(yīng)蛋白等；內(nèi)分泌檢測(cè)，如甲狀腺，胰腺，性激素，孕酮，睪酮，生長(zhǎng)激素，生長(zhǎng)抑素，內(nèi)皮素，皮質(zhì)醇，骨鈣素，催乳素，促腎上腺皮質(zhì)激素，促卵泡素，雌二醇，雌三醇，5-羥色胺，17-羥孕酮等；肝纖維化檢測(cè)，如纖維連接蛋白，透明質(zhì)酸，膠原，基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子，基質(zhì)金屬蛋白酶，層粘蛋白等；自身免疫檢測(cè)，如甲狀腺，鹽水可提取核抗原抗體(ENA)，抗核抗體，DNA，抗心磷脂抗體，類(lèi)風(fēng)濕因子，循環(huán)免疫復(fù)合物，抗胰島細(xì)胞抗體，胰蛋白酶原，Sm，大皰性類(lèi)皰瘡，ELISA試劑盒蛋白酶，短膜蟲(chóng)法，肝-腎，肝-腎-胃，肌內(nèi)膜抗體，角蛋白抗體，抗核抗體，抗核糖體蛋白抗體，抗聚角蛋白微絲蛋白抗體，抗鏈O，抗卵巢抗體，抗平滑肌抗體，抗線粒體抗體等。

技術(shù)優(yōu)勢(shì)：操作簡(jiǎn)單，且樣品處理方便，且其對(duì)于分析物的靈敏度高、特異性好，而且檢測(cè)結(jié)果快速且準(zhǔn)確可靠，能夠被自動(dòng)化的處理和分析。

5.電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)器（MSD）

利用電化學(xué)發(fā)光原理，靈敏度高、背景低、線性范圍廣。同時(shí)通過(guò)每個(gè)小孔不同位點(diǎn)包被不同抗體來(lái)實(shí)現(xiàn)多重檢測(cè)，一次可以檢測(cè)10個(gè)多因子。

技術(shù)原理：MSD電化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測(cè)技術(shù)使用SULFO-TAG標(biāo)記物，在MULTI-ARRAY和MULTI-SPOT微孔板的電極表面通電后，電化學(xué)作用激發(fā)SULFO-TAG標(biāo)記物發(fā)出強(qiáng)光。

應(yīng)用領(lǐng)域：MSD主要應(yīng)用于PK（靈敏度要求高的藥物）、ADA、PD多因子檢測(cè)等領(lǐng)域。在心腦血管疾病、免疫/炎癥、代謝性疾病、神經(jīng)退行性疾病、癌癥、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路等研究相關(guān)領(lǐng)域發(fā)揮重要作用，涉及HER2、PD-1/PD-L1等熱門(mén)靶點(diǎn)。

技術(shù)優(yōu)勢(shì)：MSD為電化學(xué)發(fā)光，具有更好的信噪比；具有更寬的檢測(cè)范圍；同一反應(yīng)孔內(nèi)可進(jìn)行多個(gè)因子的檢測(cè)；具有嚴(yán)格的質(zhì)控檢測(cè)試劑。

6.免疫組化（IHC）

一種廣泛應(yīng)用于組織和細(xì)胞研究中的技術(shù)，它可以為研究人員提供有關(guān)細(xì)胞類(lèi)型、分子組成、表達(dá)和亞細(xì)胞定位的重要信息。IHC可用于許多疾病研究和分子診斷，是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的一項(xiàng)重要工具。

技術(shù)原理：利用抗體的特異性與組織或細(xì)胞中的特定抗原結(jié)合，并通過(guò)標(biāo)記物（如酶或熒光）的特異性檢測(cè)抗原的位置和表達(dá)情況。IHC主要包括以下步驟：樣品處理、抗原恢復(fù)、阻斷和抗體處理、標(biāo)記物檢測(cè)、暴露和成像等。

應(yīng)用領(lǐng)域：檢測(cè)組織和細(xì)胞中的蛋白質(zhì)表達(dá)情況以及定位，可以了解蛋白質(zhì)的分布情況、表達(dá)量和亞細(xì)胞定位等信息。特別是在癌癥的研究中，可以用于診斷、估計(jì)患者的預(yù)后情況以及選擇治療方式。除此之外，IHC 技術(shù)還可應(yīng)用于檢測(cè)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、炎癥反應(yīng)、自身免疫性疾病、感染病等等。

技術(shù)優(yōu)勢(shì)：樣品處理簡(jiǎn)單，操作性較強(qiáng)；只需要少量的樣本就可以開(kāi)展實(shí)驗(yàn)；可以同時(shí)檢測(cè)多種不同的物質(zhì)；可以使用多種常規(guī)的組織染色方法，如熒光染色、酶標(biāo)記染色等等。

7.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）

結(jié)合了液相色譜的分離能力和質(zhì)譜的分析能力，可以高靈敏和高選擇性的進(jìn)行化合物的分析，是目前在生物分析領(lǐng)域中廣泛使用的高通量分析技術(shù)。

技術(shù)原理：液相色譜用于分離復(fù)雜樣品，質(zhì)譜檢測(cè)器用于檢測(cè)分離后的化合物，以確定分子的質(zhì)量和結(jié)構(gòu)。

應(yīng)用領(lǐng)域：用于分離和鑒定某種特定化學(xué)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和含量，如不揮發(fā)性化合物、極性化合物、熱不穩(wěn)定化合物、大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）的分析測(cè)定。被廣泛應(yīng)用于許多領(lǐng)域，如臨床診斷、藥物研發(fā)、食品安全、環(huán)境污染等。

技術(shù)優(yōu)勢(shì)：檢測(cè)靈敏度高，能夠檢測(cè)到低濃度的化合物甚至輕微的化學(xué)變化；顯著提高了檢測(cè)效率和準(zhǔn)確性，尤其適用于樣品分離和分析；能夠同時(shí)鑒定和定量多種化學(xué)物質(zhì)，提供更詳細(xì)和全面的分析結(jié)果；操作簡(jiǎn)單、效率高和可重復(fù)性好，且標(biāo)準(zhǔn)化程度較高，可以大規(guī)模生產(chǎn)和商業(yè)化應(yīng)用。

結(jié)語(yǔ)

在藥物研發(fā)的不同階段，生物標(biāo)志物均有廣泛的運(yùn)用。生物標(biāo)志物可用于候選藥物的篩選，減少藥物研發(fā)成本，避免藥物在后期臨床階段失敗的重大損失。生物標(biāo)志物還可用于疾病的鑒定和診斷、病人篩選和治療效果預(yù)測(cè)、監(jiān)控治療進(jìn)程和疾病進(jìn)程以及反映治療效果等各個(gè)方面。

有濟(jì)醫(yī)藥臨床藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)室可以為客戶提供生物標(biāo)志物檢測(cè)的一站式專(zhuān)業(yè)實(shí)驗(yàn)室服務(wù)；同時(shí)支持項(xiàng)目管理、數(shù)據(jù)管理和樣本運(yùn)輸管理服務(wù)，為新藥臨床研究提供高質(zhì)量的數(shù)據(jù)支持，幫助客戶對(duì)其臨床試驗(yàn)做出更好，更快的決策。