二、整體考慮

三、脂質體藥物非臨床藥代動力學研究

（一）受試物

（二）研究內容

2.1 吸收

2.2 分布

2.3 代謝

2.4 排泄

2.5 藥物相互作用

2.6脂質體材料

（三）生物樣本分析

3.1 生物樣本中的穩(wěn)定性

3.2 生物樣本處理方法

3.3 分析方法及驗證

（四）數(shù)據(jù)分析及評價

四、其他需關注的問題

（一）不同給藥途徑脂質體藥物的特殊考慮點

（二）PEG化長循環(huán)脂質體的特殊考慮點

（三）細胞水平研究

（四）不同申報情況的考慮

脂質體系指類脂雙分子層形成的微小囊泡。脂質雙分子層內部為水相隔室或被水相隔開，其粒徑大小可以從幾十納米到幾十微米。脂質體藥物系指將一種或多種活性成分（Active Pharmaceutical Ingredient，API）包載于脂質體的脂質雙分子層內或（和）水相內而形成載藥脂質體的一類藥物制劑。其中，粒徑處于納米級的脂質體藥物是一類具有代表性的載體類納米藥物。

與普通藥物制劑相比，脂質體通過對藥物的包載、結構組成的調整和表面的修飾，可以提高藥物的體內外穩(wěn)定性、改變活性成分的體內過程，進而可能改善藥物的藥代動力學特征，以期實現(xiàn)藥物的減毒、增效或（和）患者順應性的提高。因此，對脂質體藥物進行科學和全面的藥代動力學研究，獲得基本藥代動力學參數(shù)，闡明藥物的吸收、分布、代謝和排泄（Absorption,  Distribution, Metabolism, Excretion, 簡稱ADME）的過程和特征，揭示其在體內的動態(tài)變化規(guī)律，能夠為設計和優(yōu)化臨床試驗給藥方案提供有關參考信息，在脂質體藥物研究開發(fā)的評價過程中發(fā)揮重要作用。

脂質體藥物的組成、結構、尺寸、表面性質、藥物包封率、存在形式等可能顯著影響其穩(wěn)定性、藥物釋放以及脂質體-生物膜之間的相互作用，進而影響藥物的安全性和有效性。有關脂質體藥物的組成、特點等相關信息參見《脂質體藥物質量控制研究技術指導原則》。

本指導原則主要適用于化學藥物脂質體產(chǎn)品的非臨床藥代動力學研究，包括創(chuàng)新藥、改良型新藥和仿制藥。另外，部分脂質體仿制藥可參考個藥指導原則（如適用）。雖然單抗、多肽或小分子等配體修飾形成的主動靶向脂質體藥物以及環(huán)境響應類脂質體藥物在國內外已有研究，但情況復雜，本指導原則暫不包括此類脂質體藥物的非臨床藥代動力學研究，但整體思路和部分共性的非臨床藥代動力學研究可借鑒本指導原則，并根據(jù)品種具體特點進行相應的非臨床藥代動力學研究。

本指導原則在參考國內外已上市脂質體藥物的相關信息、相關指導原則、科研文獻等的基礎上，結合我國脂質體藥物的研發(fā)現(xiàn)狀而起草，主要關注脂質體藥物特有的技術要求，旨在為脂質體藥物的非臨床藥代動力學研究提供技術指導，促進脂質體藥物的合理開發(fā)和有效監(jiān)管。

脂質體藥物在遞送至組織后，通常通過以下過程發(fā)揮藥效作用：脂質體藥物到達靶組織/靶部位后釋放活性成分，或活性成分自脂質體釋放后到達組織/靶部位。

一般而言，脂質體藥物的藥代動力學特征可能取決于：（1）包封活性成分的脂質體藥物自身的清除；（2）包封的活性成分自脂質體中的釋放速率；（3）未包封活性成分的清除和代謝；（4）脂質體藥物的分布（器官和/或組織分布的變化以及分布的活性成分的量）；（5）脂質體或活性成分與血漿或血清蛋白、血細胞或血管內皮的相互作用等。

由于脂質體的質量屬性（如大小、表面電荷、形態(tài)和表面修飾等）可能影響脂質體藥物的體內分布，因此研究質量屬性和體內分布之間的關系有助于證明脂質體藥物的合理性。

除此之外，與其他載體類納米藥物相比，脂質體藥物具備自身特征，包括以兩親性脂質作為主要載體材料，具有脂質雙分子層和囊泡樣結構（包括小單層脂質體、大單層脂質體、多層脂質體、多囊泡脂質體），藥物在脂質體中具有獨特的空間分布和存在形式，因此，脂質體藥物的非臨床藥代動力學研究具有其特殊性。

（一）受試物

脂質體藥物的組成、結構、尺寸、表面性質、藥物包封率及存在形式等可能顯著影響其穩(wěn)定性、藥物釋放以及生物相互作用等，因此需特別關注受試物的質量屬性。

應采用工藝相對穩(wěn)定、能充分代表臨床擬用樣品的脂質體藥物的受試物開展非臨床藥代動力學研究。

受試物在貯存、運輸、配制和測定過程中，其性質有可能發(fā)生變化（如聚集、泄漏、結構破壞等），從而導致動力學行為改變，而不能真實反映脂質體藥物的藥代動力學特征，因此，在上述過程中需確保受試物的相關性質不發(fā)生明顯改變。

基于脂質體藥物的特殊性，對受試物的其他要求參見《脂質體藥物質量控制研究技術指導原則》。

（二）研究內容

2.1 吸收

現(xiàn)有的脂質體藥物多為靜脈給藥，但也存在其他給藥途徑，包括口服、吸入、經(jīng)皮和透皮、肌肉或皮下注射、鼻腔和眼內給藥途徑等。脂質體藥物與載體類納米藥物的吸收特征相似，因此可參照載體類納米藥物吸收研究要求開展脂質體藥物的載藥脂質體、活性成分和載體材料體內吸收動力學試驗。

應使用合適的動物種屬和/或模型，選取合適的劑量，并根據(jù)給藥方式，在吸收相、平衡相和消除相選擇合理的時間點和持續(xù)時間進行采樣，測量藥物濃度，分析藥代動力學參數(shù)，包括：最大血藥濃度（Cmax）、血藥濃度-時間曲線下面積（AUC）、半衰期（t_1/2）等。應討論脂質體藥物制劑引起活性成分的藥代動力學變化。

在靜脈給藥的情況下，應特別關注初始分布相內（如，15分鐘以內）的生物樣本采集，盡可能準確地獲取藥代參數(shù)，以更好地描述脂質體藥物在體內的藥動學特征，并評估脂質體在血液循環(huán)中的穩(wěn)定性。

聚乙二醇（Polyethylene glycol，PEG）化脂質在脂質體中作為載體材料被廣泛應用，含有PEG化脂質的脂質體藥物可能存在“加速血液清除”（Accelerated Blood Clearance, ABC）現(xiàn)象。因此，此類脂質體藥物在多次給藥試驗時，需要關注ABC現(xiàn)象，及是否存在抗PEG抗體。當存在ABC現(xiàn)象時，PEG化脂質體在注射給藥后清除較快，更應關注采血時間點的合理設計。

2.2 分布

脂質體藥物的體內分布研究與載體類納米藥物聚焦的問題基本相同，需重點關注載藥脂質體-游離型藥物-載體材料多種形態(tài)的動態(tài)變化過程。應評估脂質體藥物在與擬定臨床用途和給藥途徑相關的靶器官和/或組織中的分布。

目前，大多數(shù)研究關注血液中游離型藥物/負載型藥物以及組織中總藥物的暴露量，但是，靶組織與其他非靶組織中的藥物濃度，特別是游離藥物濃度，是評價脂質體藥效和毒性的關鍵，因此建議進行脂質體藥物組織中游離型藥物/負載型藥物的測定。

在組織分布研究時，參考血藥濃度-時間曲線的變化趨勢，選擇至少3個時間點進行采樣（包括吸收相、平衡相和消除相）。另外，應根據(jù)給藥途徑選擇具有重要功能的器官，如：涉及藥效和毒性的器官、與清除有關的重要器官、易于蓄積的器官（如肝、脾、腎、骨髓、肺和心臟）、受血-組織屏障保護的器官（如腦、胎盤和睪丸等）。一些具有特殊毒性器官的脂質體藥物，需要根據(jù)具體情況制定試驗方案。

此外，對于表面上含有配體或抗體的主動靶向脂質體藥物，應同時關注這些特殊功能修飾所引起的其在靶器官/組織及其他器官/組織中的分布差異。

2.3 代謝

脂質體負載的活性成分或構成脂質體的載體材料，在脂質體藥物的尺度效應下，可能會呈現(xiàn)出與游離狀態(tài)不同的分布和轉運特性，導致其分布的組織、細胞及細胞器與游離狀態(tài)下有所不同，并且因而可能產(chǎn)生新的代謝途徑以及代謝產(chǎn)物。因此，應確定活性成分和載體材料的主要代謝/降解途徑和機制，并對其代謝/降解產(chǎn)物進行表征/鑒定。

當脂質體藥物的主要代謝產(chǎn)物具有生物活性時，需要對血液、血漿或血清（建議也包括器官和/或組織）中活性代謝產(chǎn)物進行藥代動力學研究，并建議進行多次給藥以考察蓄積情況，必要時進行毒代動力學研究。

對于某些脂質體藥物，其負載的活性成分在被脂質體轉運并釋放至生物環(huán)境中后會被迅速代謝，測定游離型藥物可能存在困難，可以用其代謝產(chǎn)物間接研究游離型藥物的藥代動力學。

2.4 排泄

脂質體的理化性質，如脂質體成分、尺寸、電荷以及表面修飾等，在其體內清除的過程中起著關鍵作用。脂質體藥物的排泄特征與載體類納米藥物相似，在此不再進行贅述。

需要注意的是，某些藥物或載體材料并不以原形進行排泄，需要鑒定其代謝產(chǎn)物，然后根據(jù)藥物或載體材料的具體情況對其開展排泄研究。

2.5 藥物相互作用

脂質體藥物進入體內后，載藥脂質體、游離型藥物、載體材料都可能會對代謝酶和轉運體產(chǎn)生影響。聯(lián)合用藥時，可能發(fā)生基于載藥脂質體、游離型藥物、載體材料與其他藥物之間的相互作用，而帶來潛在的安全性風險。因此，應根據(jù)脂質體藥物與其相應的普通制劑藥代動力學特征的差異，考察脂質體藥物的藥物相互作用風險。若缺乏普通制劑的藥物相互作用研究資料，應首先考察活性成分對藥物代謝酶和轉運體的影響及其聯(lián)合用藥時的藥物相互作用風險。

載藥脂質體進入機體后，可能會與蛋白發(fā)生結合，在其表面形成蛋白冠，進而影響載藥脂質體的藥物釋放、血液循環(huán)時間、靶向性、生物分布、免疫反應、細胞攝取和毒性等行為。因此，鼓勵進行載藥脂質體蛋白冠的表征。

2.6 脂質體材料

脂質體藥物中不同類型的脂質體材料，由于其理化性質的特殊性，可能與不同的蛋白質結合，進而影響脂質體藥物在體內的生物學行為和藥理學特性等，甚至可能引起藥物突釋而產(chǎn)生安全性問題。因此，對于新的脂質體材料，或藥代動力學資料缺乏或不足的脂質體材料，建議對其進行藥代動力學研究。在研究時，應關注脂質體材料本身與其脂質體形態(tài)的體內命運可能不同。

如脂質體處方成分的類別和結構與先前研究過的脂質體藥物所用材料相同時，可提供已有的相關數(shù)據(jù)。如脂質體處方成分的類別相同，而結構與之前研究過的脂質體藥物所用材料不同時，由于結構改變可能會對脂質體的分布、代謝等藥代行為產(chǎn)生影響，建議必要時對此類脂質體材料進行藥代動力學研究。

（三）生物樣本分析

應開發(fā)合適的能夠測定生物樣本中藥物濃度（總濃度和/或游離型藥物濃度，必要時為負載型藥物濃度）的分析方法。

3.1 生物樣本中的穩(wěn)定性

應對脂質體藥物在適當動物種屬的全血或血漿、其他體液、排泄物、生物組織勻漿液等中的體外穩(wěn)定性進行研究。同時，應對脂質體藥物在分析試驗條件下（如鹽濃度、pH 值、溫度或加入的其他試劑等）的體外釋放行為進行研究。觀察指標包括脂質體藥物泄漏或釋放情況、載體材料降解情況等。

3.2 生物樣本處理方法

生物樣本在采集之后的貯存、運輸、凍融過程中應當保證樣本的穩(wěn)定。如在上述過程無法中保持脂質體的穩(wěn)定性，在采集樣本后，應及時對其進行處理，如加入穩(wěn)定劑，或將脂質體釋放的游離藥物/載體材料與脂質體藥物進行分離后再分別進行貯存等，以避免在冷凍貯存過程中脂質體發(fā)生破裂，干擾后續(xù)脂質體藥物不同組分的測定。

脂質體藥物在進入體內后，活性成分一般會以游離型藥物與負載型藥物的形式存在，在進行生物樣本分析時需要對二者進行有效分離。分離生物樣本中游離型/負載型藥物的常用方法包括平衡透析、超速離心、超濾、固相萃取、排阻色譜、柱切換色譜等。選取的分離方法應防止脂質體制劑在分離的過程中發(fā)生泄漏或破裂。

此外，在游離型和負載型藥物分離過程中，應對與血漿蛋白結合的藥物與負載型藥物進行區(qū)分?？梢圆捎猛凰匦Ｕ蚱渌椒ǐ@得不同藥物形態(tài)的真實濃度。

組織分布研究中，脂質體藥物極易在組織處理過程中發(fā)生滲漏或破裂，所以應注意脂質體樣本在組織樣本處理過程中的穩(wěn)定性。

3.3 分析方法及驗證

試驗時需根據(jù)脂質體藥物制劑的具體情況采用合適并經(jīng)過驗證的分析方法?；钚猿煞?、載藥脂質體和載體材料的常用分析方法可參見《納米藥物非臨床藥代動力學研究技術指導原則（試行）》。

建立脂質體藥物生物樣本分析方法時，應考慮載藥脂質體以及載體材料對方法的影響。需要關注的是，校正曲線和質控樣本的制備和處理應模擬給藥后載藥脂質體、游離型藥物、負載型藥物、載體材料的體內實際狀態(tài)（真實場景）。

分析方法學驗證內容參照相關指導原則。

（四）數(shù)據(jù)分析及評價

應有效整合各項試驗數(shù)據(jù)，對測定獲得的脂質體藥物的游離型藥物、負載型藥物、總藥物濃度進行比較分析，對上述三種形態(tài)分別進行非房室/房室模型參數(shù)的求算，如用計算機處理數(shù)據(jù)，應注明所用程序的名稱、版本和來源，并對其可靠性進行確認。

鼓勵根據(jù)脂質體藥物體內游離型藥物濃度、負載藥物濃度兩者之間的時程變化過程建立整體生理藥代動力學或最簡生理藥代動力學模型來描述體內游離型藥物和負載型藥物兩者之間的轉化過程，以及血漿、靶組織和非靶組織的藥物分布動力學時程關系。

對于不同給藥途徑的脂質體藥物，在進行非臨床藥代動力學研究時，除了上文所涉及的研究內容外，尚需要關注以下內容：對于局部給藥的脂質體藥物，在非臨床藥代動力學研究評價中應關注脂質體藥物全身的吸收、組織分布與蓄積情況。同時，與一般給藥途徑相比，局部給藥通常會導致局部器官或組織濃度過高，進而可能導致潛在的毒性，應根據(jù)不同的給藥途徑具體分析。

（二）PEG化長循環(huán)脂質體的特殊考慮點

含有PEG化脂質的脂質體可以在體內保持長循環(huán)，但在重復給藥時可能會發(fā)生ABC現(xiàn)象，并且還可能減少細胞對脂質體的融合和內吞，降低脂質體的內體逃逸效率。因此，建議在體外對血漿中長循環(huán)脂質體中的PEG化脂質進行脫落動力學研究。

（三）細胞水平研究

許多脂質體負載著作用于細胞內靶點的藥物，此類脂質體藥物能否高效地進入靶細胞，能否在靶細胞內快速釋放藥物，釋放出的游離藥物能否與靶點有效結合，以脂質體的形式進入細胞后能否減少靶細胞中的藥物外排，這些都是影響脂質體藥物發(fā)揮藥效的關鍵因素。在脂質體處方研究過程中，鼓勵對載藥脂質體的胞內轉運過程進行研究。

（四）不同申報情況的考慮

[1] FDA. Guidance for Industry: Liposome Drug Products Chemistry, Manufacturing, and Controls; Human Pharmacokinetics and Bioavailability;  and Labeling Documentation. 2015.

[2] FDA. Guidance for Industry: Considering Whether an FDA-Regulated Product Involves the Application of Nanotechnology. 2014.

[3] FDA. Guidance for Industry: Drug Products, Including Biological Products, that Contain Nanomaterials. 2022.

[4] EMA. Data requirements for intravenous liposomal products developed with reference to an innovator liposomal product. 2013.

[5] MHLW. Guideline for the Development of Liposome Drug Products. 2016.

[6] NMPA. 納米藥物非臨床藥代動力學研究技術指導原則（試行）. 2021.